土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶的酶学特性及其对大豆异黄酮的水解

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 生物学
• 关键词: β-葡萄糖苷酶 土曲霉 酶学特性 水解 大豆异黄酮
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 455-464
• 页数: 10页
• 分类号: Q55
• 语种: 英文

摘要

目的：分离纯化土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶（At-Bgl），探究其酶学特性及其对大豆异黄酮的水解效果。<br>　　创新点：成功将At-Bgl分离纯化出来，并首次将分离纯化后的At-Bgl应用于水解大豆异黄酮糖苷。<br>　　方法：利用超滤、透析、阴离子交换柱层析和聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）等手段分离纯化土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶（表1），并用解析电离串联飞行时间质谱技术（MALDI-TOF/TOF MS）鉴定蛋白条带。以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷（pNPG）为底物进行酶学特性研究；以 pNPG和纤维二糖为底物，进行酶动力学参数研究（表2）；以胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟动物胃肠道酸性环境，进行酸耐受性研究。通过高效液相色谱（HPLC）检测At-Bgl对大豆异黄酮糖苷的水解效果（表3）。<br>　　结论：At-Bgl属糖苷水解酶第三家族（GH3），分子量约为120 kDa（图1），最适酶解条件为pH 5.0和65°C，具有良好的热稳定性和pH稳定性（图2），且胃蛋白酶和胰蛋白酶耐受性强（图3）。At-Bgl可将大豆异黄酮糖苷高效转化为异黄酮苷元（图4）。综上所述，At-Bgl在增强动物胃肠道对大豆异黄酮的水解方面具有重要应用价值。