自动诱导表达体系表达片球菌素融合蛋白

• 作者: 周志江 檀茜倩 肖华志 韩烨
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 自动诱导 IPTG 包涵体 分离纯化 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2016,（15）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 170-175
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2016.15.025

摘要

分别采用IPTG诱导和自动诱导方法诱导E.coli BL21(DE3)基因工程菌表达片球菌素融合蛋白;采用稀释方法对变性后的片球菌素融合蛋白包涵体进行复性,复性后融合蛋白经Ni-IDA柱分离纯化后经肠激酶酶切得目的片球菌素蛋白;以单核细胞增多症李氏杆菌为指示菌,采用牛津杯法测定所得到的片球菌素活性,并对其热稳定性,耐酸碱性和耐蛋白酶活性进行了分析.实验结果表明,经过诱导后,IPTG诱导菌液最终OD600值为3.5000,而自动诱导为7.6998,IPTG诱导融合蛋白包涵体采用尿素溶解后的蛋白浓度为0.1001 mg/mL,而自动诱导为0.2359 mg/mL;自动诱导体系所获得的片球菌素融合蛋白产量优于IPTG诱导体系.所获得的片球菌素对单核细胞增多症李氏杆菌有抑制作用,热稳定性好,耐酸性强而耐碱性弱,对胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶和蛋白酶K敏感,可以被降解.自动诱导体系可以应用于片球菌素融合蛋白的E.coli BL21 (DE3)基因工程菌高效表达片球菌素.