SynGAP(1-700aa)中670-685aa缺失突变质粒的构建及表达

• 作者: 张清秀 荣良群 高红 魏秀娥
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: SynGAP 重叠延伸聚合酶链式反应 缺失突变
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 832-835
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2016.06.002

摘要

目的:缺失突变SynGAP(1-700 aa)-Flag中的670-685aa片段,为后续实验中新的药物靶点的鉴定提供可靠理论依据.方法:以前期构建好的pCMV-SynGAP (1-700aa)-Flag质粒为模板,重叠延伸PCR技术缺失突变670-685aa片段,扩增出目的片段;限制性内切酶将载体线性化,然后分别纯化目的片段与线性化载体;利用同源重组技术连接目的片段与线性化载体,获取重组质粒;PCR技术鉴定重组质粒构建成功,测序进一步验证质粒碱基正确;将质粒转入293T细胞,免疫印迹鉴定能否成功表达.结果:重叠PCR成功缺失突变670-685aa片段,成功构建重组质粒,且测序正确.免疫印迹结果表明,SynGAP (1-700aa)缺失突变670-685aa片段后仍可成功表达.结论:成功缺失突变SynGAP(1-700aa)中的670-685aa片段,并且在细胞株中稳定表达.该质粒的成功构建,为我们的后续研究奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	荣良群	徐州医科大学第二附属医院神经内科	25	56	4.0	6.0
2	魏秀娥	徐州医科大学第二附属医院神经内科	26	57	4.0	6.0
3	高红	徐州医科大学第二附属医院神经内科	7	5	2.0	2.0
4	张清秀	徐州医科大学第二附属医院神经内科	11	35	3.0	5.0