CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建

• 作者: 李健 李晋 李晓泽 石磊 赵树进 赵永攀
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CYP4F2基因 β-actin基因 实时荧光定量PCR 重组质粒 标准品
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 分子诊断与基因检测
• 页码范围: 98-100
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 制备用于CYP4 F2和β-actin基因mRNA实时荧光定量PCR检测的标准品质粒与标准曲线.方法 通过PCR扩增CYP4F2和β-actin进行双酶切鉴定和测序分析,确保重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,目的片断纯化后直接连接于pGEM-T easy载体,转化Ecoli DH5α宿主菌,获得阳性克隆;通过PCR扩增进行荧光定量PCR检测分析.结果 CYP4 F2和β-actin基因目的片段均成功重组,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的实时荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.结论 成功构建了CYP4 F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵树进		271	2349	23.0	37.0
2	李健		42	130	6.0	9.0
3	石磊		90	460	12.0	16.0
4	李晋		31	91	6.0	8.0
5	李晓泽		2	0	0.0	0.0
6	赵永攀		2	0	0.0	0.0