Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 左伟勇 成大荣 朱善元 洪伟鸣 王安平 蔡树东 顾玲玲
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ型鸭肝炎病毒 VP1基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 151-154
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+9
• 字数: 3234字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.01.024

摘要

根据已经发表的Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因序列,设计1对特异性引物(上下游分别插入Bam H Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点),利用PCR技术扩增出VP1基因,经Bam H Ⅰ和SacⅠ双酶切后,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获得重组表达质粒pET-VP1.重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),重组蛋白经IPTG诱导成功表达.将重组蛋白切胶免疫6周龄的BALB/c小鼠,3次免疫后采血,制备DHV-Ⅰ的多克隆抗体.SDS-PAGE结果显示,成功表达出的重组蛋白分子量约为46 000.Western-blotting分析结果表明,该重组蛋白可与His组氨酸鼠单克隆抗体发生特异性反应,Western-blotting检测抗鼠DHV多抗的结果显示,DHV多抗能与目的蛋白发生特异性反应.以上结果表明,DHV的VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的DHV多抗能用于VP1蛋白表达的检测.