团头鲂转录因子Oct4的原核表达和多克隆抗体的制备

• 作者: 于淼 方健 李玲玉 潘启华 薛亭 邓羽 陈凯 陈天圣
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 团头鲂 Oct4 原核表达 多克隆抗体 转录因子
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 8-15
• 页数: 8页
• 分类号: S917.4
• 字数: 4917字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12024/jsou.20170702097

摘要

为进一步分析鱼类干细胞多能性转录因子Oct4的功能,将团头鲂(Megalobrama amblycephala)Oct4进行原核表达并制备了兔抗Oct4多克隆抗体.采用RT-PCR方法从团头鲂卵巢中扩增Oct4基因的部分编码片段,插入载体pET32a中构建重组原核表达载体pET32a-MaOct4;将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导、Ni2+亲和柱层析纯化获得分子量约49 ku的可溶性重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备抗体,通过ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性.实验结果表明:该重组载体在37℃,0.5 mmol/L IPTG条件下诱导4 h可获得Ma-Oct4重组蛋白的高效表达;制备的团头鲂Oct4多克隆抗体能够分别与纯化的Oct4蛋白、原核表达的Oct4蛋白、团头鲂胚胎中的内源Oct4蛋白以及HepG2细胞中过表达的Ma-Oct4:DsRed融合蛋白特异结合.为后续深入研究团头鲂Oct4在干细胞多能性调控中的作用提供了有效的分子工具.