小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 何苗 余树芳 冯倩 刘丹 吴锦艳 周岩岩 孙晶晶 尚佑军 李娇阳 李玲霞 魏凡华
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 N基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1277-1282
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0173

摘要

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria 75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达.结果 表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好.这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性.