乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

• 作者: 俞漪 刘洋 张娜娜 徐琼 段文锋 窦同海 翁史昱 赵渝
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 嗜酸乳杆菌 定量 检测
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: Q93.331
• 字数: 5221字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180123-301

摘要

目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法.方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测.结果:该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3 pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下.同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好.利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测.对市售的11 份样品进行检测,其中6 份含有嗜酸乳杆菌菌株,5 份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×102～3.68×104 CFU/mL之间.结论:建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌.