枯草杆菌蛋白酶QK的活性与氨基酸突变位点的相关性

• 作者: 刘秋晨 周立 唐艺萍 杨媛媛 梁宁 王业富
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 枯草芽孢杆菌蛋白酶 QK基因 酶活 氨基酸突变位点
• 年，卷（期）: 2019,（13）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 89-93
• 页数: 5页
• 分类号: TS201.3
• 字数: 3765字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.13.015

摘要

目的:鉴定不同来源的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的枯草杆菌蛋白酶QK(subtilisin QK)的活性与编码其序列的氨基酸位点突变的相关性.方法:以筛选得到的15株菌株的总DNA为模板,细菌16S rRNA为通用引物,进行PCR扩增,将产物测序后输入NCBI比对,确定其均为枯草芽孢杆菌属.再扩增这15株菌株的QK基因,测序后与GenBank上已提交的QK基因所对应的蛋白序列进行比对,找出氨基酸差异位点.使用纤维蛋白平板法测定菌株所产枯草杆菌蛋白酶的活性,用BCA蛋白测定试剂盒测定发酵液的总蛋白含量,并计算得到单位酶活.结果:根据突变位点的不同把15株菌株分为A、B、C、D四组.A组的突变位点为S184T,单位酶活显著最高(p＜0.05);B组的突变住点为Q90K,N193S,S236T,N365S,C组的突变位点为N193S,S236T,A289V,B、C两组之间单位酶活并无显著性差异(p＞0.05),但B、C两组单位酶活显著小于A组(p＜0.05);D组的突变位点为Q90K,N193S,S236T,A289V,单位酶活显著低于其他三组(p＜0.05).结论:枯草杆菌蛋白酶QK的单位酶活与氨基酸突变位点之间有相关性:S184T和N365S位点变化对单位酶活性有促进作用,A289V位点变化对单位酶活性有抑制作用.据此推测,这些位点位于枯草杆菌蛋白酶QK的活性中心.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王业富	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	23	94	6.0	8.0
2	周立	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	18	173	8.0	13.0
3	杨媛媛	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
4	唐艺萍	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
5	刘秋晨	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
6	梁宁	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	5	40	3.0	5.0