利用CRISPR-Cas9技术构建S100A8基因敲除的CNE2细胞系

• 作者: 孟盈 杨建宇 欧阳春 黄元姣
• 来源期刊: 智慧健康
• 关键词: S100A8 CRISPR-Cas9技术 鼻咽癌 基因敲除
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 生物医学工程
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 字数: 3384字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19335/j.cnki.2096-1219.2019.10.009

摘要

目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建S100A8基因敲除的CNE2稳定细胞系.方法 通过慢病毒转染,构建可以稳定表达Cas9蛋白的CNE2细胞株.针对S100A8基因作用的功能区域,设计靶向S100A8基因的gRNA,构建Lentiguide-Puro-sg重组质粒并转化stbl3感受态细胞,筛选出重组子后通过测序验证gRNA的有效性.测序鉴定后将Lentiguide-Puro-sg重组载体通过转染试剂转染CNE2细胞系.通过嘌呤霉素进行阳性单克隆筛选,通过Western Blot检测S100A8基因的表达.结果 测序结果显示LentiGuide-Puro-sg载体构建成功;Western Blot结果显示转染过LentiGuide-Puro-sg重组载体的细胞的S100A8不表达.结论 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建了S100A8基因敲除的CNE2细胞,为后续继续研究S100A8基因在鼻咽癌细胞中的作用机制和功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄元姣		30	93	6.0	7.0
2	杨建宇		4	0	0.0	0.0
3	孟盈		4	7	1.0	2.0
4	欧阳春		6	4	1.0	2.0