基于密码子优化策略的牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的原核表达及纯化

• 作者: 刘长彬 卢春霞 杨华 石国庆
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛妊娠相关糖蛋白 密码子 重组蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 122-129
• 页数: 8页
• 分类号: S823.9+13+.5
• 字数: 6756字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2020.01.017

摘要

为了构建pET30a-bPAG9重组表达载体,并在BL21(DE3)感受态细胞中转染高效表达牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9),通过生物信息学技术对bPAG9基因进行密码子优化,人工合成bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体pET30a中.将构建的重组质粒pET30a-bPAG9转染至BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,经过超声波裂解和亲和层析方法获得重组蛋白bPAG9.用SDS-PAGE和Western Blot方法检测重组蛋白bPAG9的表达效果.结果显示,PCR扩增得到1128 bp的优化bPAG9基因片段,构建的重组质粒pET30a-bPAG9经双酶切获得约5244 bp和1125 bp的2条片段,与预期值相符;对重组载体测序,测序结果与优化后的基因碱基序列完全一致,编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示,获得相对分子质量约为4.0×104的bPAG9重组蛋白,通过亲和层析纯化后,重组蛋白bPAG9纯度到达90％以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春霞	长江师范学院现代农业与生物工程学院	8	0	0.0	0.0