幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原的可溶性表达及其多克隆抗体的制备和分析

• 作者: 何萌 张国林 李元 韩学波 刘宏鹏 李欣 钱玲玲 刘昆梅 郭乐
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 幽门螺杆菌 致病岛 CagL蛋白 特异性抗体
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-27
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2007040

摘要

目的:利用原核表达和蛋白质纯化技术获得高纯度的幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原(rCagL),利用其制备anti-CagL多克隆抗体,并分析抗体的特异性.方法:通过生物信息学软件分析rCagL的抗原结构;利用PCR长片段DNA合成技术合成不含有信号肽序列的幽门螺杆菌致病岛CagL基因,将其插入表达质粒pCznl中,构建重组质粒pCznl-rCagL.然后,将pCznl-rCagL转入大肠杆菌Arctic Express中,经IPTG诱导表达后,通过Ni-IDA镍离子亲和层析纯化重组抗原rCagL,利用Western blot鉴定rCagL与His标签抗体和Anti-H.pylori抗体的免疫反应性;最后,通过rCagL辅以弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,制备anti-CagL多克隆抗血清,通过ELISA方法分析抗血清的特异性.结果:生物信息学软件表明重组抗原rCagL具有较好的抗原性质;重组质粒pCznl-rCagL经双酶切和基因测序等技术鉴定,证实rCagL核苷酸序列与理论序列完全一致;基因工程菌株pCznl-rCagL/Arctic Express在低温11℃条件经IPTG诱导表达.SDS-PAGE实验结果证实:rCagL可实现相对高效地可溶性蛋白表达,可溶性蛋白约占包涵体的62.07％.经Ni-IDA亲和层析柱纯化,可获得高纯度rCagL,纯度约为96.6％.Western blot结果证实:重组抗原rCagL可特异性与His标签抗体和Anti-H.pylori抗体结合.ELISA结果证实:经rCagL免疫小鼠制备的多克隆抗体anti-CagL可特异性识别rCagL和H.pylori裂解物,具有较高的抗体特异性.结论:重组抗原rCagL在低温条件下可实现可溶性表达,经纯化可获得高纯度抗原蛋白;rCagL具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体具有较好的免疫特异性,为发展H.pylori相关诊断试剂奠定了实验基础.