动力学法优化碱性果胶酶比活的测定方法

• 作者: 吕兴霜 张凤国 张永勤 王鹏博 詹志春 许文廷 邢明霞 邬雅喃 陈相玉
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 碱性果胶酶 蛋白浓度 酶活力 测定 动力学
• 年，卷（期）: 2020,（23）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 223-228,235
• 页数: 7页
• 分类号: TS207.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2020040220

摘要

本文通过优化蛋白浓度测定方法和酶活力测定方法,并以酶解动力学曲线考察方法优化的合理性,以验证终点法测定碱性果胶酶比活的准确性.结果 表明,果胶酶蛋白的最佳测定波长为550 nm,其线性和截距明显优于传统方法,可以忽略果胶酶稀释倍数对蛋白测定的影响.钙离子对该酶具有激活作用;聚半乳糖醛酸比果胶更适合作为酶活力测定底物,其最适pH为9.5,最佳浓度为2 mg/mL,果胶酶活力测定的最佳波长为232 nm,所测酶活力在吸光度值0～2范围内均保持零级反应状态,酶蛋白浓度与酶解速率线性相关且回归曲线截距更接近原点,因此,该测定条件不仅可用于终点法,酶解时间也可灵活掌握,而非拘泥于一个固定的时间段.以酶解30 min为例,其检测限(LOD)为0.15 mU/mL.由于DNS法的灵敏度较低,其半乳糖醛酸标准曲线不过原点,从而导致因酶液稀释倍数不同而产生测量误差,因此,紫外法测定碱性果胶酶活力为最佳选择.