亮氨酸氨肽酶LapA在无孢黑曲霉中的重组表达优化及酶学性质

• 作者: 林晓彤 董良波 郑俊威 王斌 潘力
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 亮氨酸氨肽酶 黑曲霉 高效表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 90-96
• 页数: 7页
• 分类号: TQ925
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20191101-005

摘要

针对目前国产食品级亮氨酸氨肽酶的工业生产产量不高的现状,将米曲霉、黑曲霉和酱油曲霉的5 个亮氨酸氨肽酶基因(lapA、laplO、lap2、laplS、laplN)在低蛋白背景的无孢黑曲霉HL-1中进行重组表达,通过信号肽替换对其编码区进行改造,利用杂合启动子PnaⅡ及营养缺陷标记pyrG构建表达载体,并基于规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9工具设计亮氨酸氨肽酶的基因组定点整合策略,获得高活力的亮氨酸氨肽酶表达菌株,重组菌株LapA-C的亮氨酸氨肽酶活力达到11701.2U/mL,比未利用CRISPR工具的LapA-T重组表达菌株的酶活力(2476.0U/mL)提高了约3.7倍.此外,通过融合6XHis标签实现了重组亮氨酸氨肽酶LapA的纯化,并对其进行了酶学性质研究:蛋白质大小约为35.0kDa,重组亮氨酸氨肽酶LapA最适pH值为8.5,最适温度为65℃.综上所述,本研究基于CRISPR策略成功实现了亮氨酸氨肽酶在黑曲霉中的高效重组表达.