黑曲霉菌为宿主菌的重组表达性质粒的构建

• 作者: David B Archer David J Jeenes 刘钟滨
• 来源期刊: 同济大学学报(医学版)
• 关键词: 重组质粒 构建 黑曲霉菌
• 年，卷（期）: 2001,（3）
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 字数: 1943字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0392.2001.03.001

摘要

目的　建立以pyrG基因为选择标志，以黑曲霉菌为宿主菌的蛋白质表达系统。方法　以PCR扩增获得的黑曲霉菌pyrG基因的部分序列片段为探针作两次噬菌斑原位杂交，从黑曲霉菌 ATCC 12049基因文库中克隆获得长度为9.8kb的DNA片段，将其中含pyrG基因的2.3kb片段亚克隆至表达性载体 PIGF中，获得重组质粒。对克隆基因进行了全基因测定和分析。以黑曲霉菌ATCC 12049的pyrG缺陷株M54为受体菌，用聚乙二醇/氯化钙方法作基因转化实验，将重组质粒导入该受体菌并在其中表达。结果　从黑曲霉菌 ATCC 12049基因文库中克隆获得了pyrG基因，构建了含该基因的重组表达性载体pYG 1.2。序列分析表明该基因与黑曲霉菌L112的pyrG基因编码序列的同源性为93.9%，两者经推导的氨基酸的同源性为98.9%。重组质粒pYG 1.2可使黑曲霉菌ATCC 12049的pyrG缺陷株M54发生基因转化，成为Pyr+。结论　在克隆了pyrG基因的基础上成功构建了以pyrG基因为选择标志，以黑曲霉菌为宿主菌的重组表达性质粒。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘钟滨	同济大学医学院微生物与免疫学教研室	28	195	7.0	13.0