超抗原SEA的基因克隆、原核表达与鉴定

• 作者: 叶菁 张秀敏 曹云新 李增山 陈广生 隋延仿
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素A 超抗原 原核表达 PCR
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 418-420
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2327字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2002.06.004

摘要

目的构建pRSET-SEA重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA),进行分离、纯化及western blot鉴定.方法采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株FRI 100基因组DNA中获得SEA全长序列,克隆入pUC19中,进行测序,构建pRSET-SEA表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,分离、纯化及western blot鉴定.结果 PCR获得超抗原SEA基因片段,DNA测序结果与文献报道一致;构建了pRSET-SEA表达质粒,并成功地诱导表达出32000 u的蛋白;Western blot鉴定所得蛋白能够与SEA单克隆抗体特异性结合.结论本研究成功地克隆了SEA全长,并进行了原核表达和分离、纯化,获得了SEA蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹云新	第四军医大学基础部免疫学教研室	108	741	14.0	21.0
2	隋延仿	第四军医大学基础部病理学教研室	88	384	10.0	13.0
3	张秀敏	第四军医大学基础部病理学教研室	53	243	8.0	11.0
4	李增山	第四军医大学基础部病理学教研室	49	273	8.0	14.0
5	陈广生	第四军医大学基础部病理学教研室	46	197	8.0	10.0
6	叶菁	第四军医大学基础部病理学教研室	79	357	10.0	13.0