人Src蛋白N端区段的表达、纯化和体外豆蔻酰化底物活性

• 作者: 李伯良 杨力 马涵慧
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Src蛋白 His-tag 融合表达 豆蔻酰化
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

利用RT-PCR技术, 从来源于人结肠癌Caco-2细胞总RNA中, 扩增得到编码人Src蛋白N端147氨基酸的DNA序列片段. 进而构建T7启动子控制下的C端His-tag融合的表达质粒pMF-SrcHT, 并转化大肠杆菌BL21(DE3). 通过SDS-PAGE等分析结果显示, 在37 °C培养条件下经IPTG诱导, C端His-tag融合的人Src蛋白N端区段(命名为SrcHT, 21 kD)得到高效表达, 并且主要以可溶性形式存在. 进一步利用Ni-IDA亲和层析分离, 从表达菌裂解上清液中一步纯化获得重组蛋白SrcHT, SDS-PAGE分析纯度达95%以上. 在此基础上, 以 [ 3H]豆蔻酰-CoA为同位素标记底物进行SrcHT的体外NMT豆蔻酰化反应测定. SDS-PAGE分离和放射自显影分析结果表明, SrcHT蛋白可被NMT有效豆蔻酰化而具有NMT的底物活性. 这些为深入详细研究Src蛋白豆蔻酰化作用和构建以Src蛋白豆蔻酰化为靶标的分子筛药体系等打下了重要基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨力	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	66	783	17.0	26.0
2	李伯良	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	14	36	3.0	6.0
3	马涵慧	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室	3	13	1.0	3.0