HIV P66蛋白的表达、纯化及活性检测

• 作者: 张晓光 张晓梅 曾毅 郭秀婵 马晶
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒属 HIV-1 P66 蛋白 原核表达 活性检测
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 364-368
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4479字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2006.05.007

摘要

此研究的目的是体外表达HIV-1逆转录酶P66亚单位蛋白,并得到纯度较高且具有活性的重组蛋白.首先通过PCR方法从含HIV-1 HXB2标准株全基因的质粒中扩增出全长p66基因,插入表达载体pTWIN1,构建pTWIN-p66质粒.再将该质粒转化到表达菌BL21,在IPTG诱导下表达P66蛋白.表达产物经几丁质柱一步纯化后得到P66蛋白纯品.纯化的P66蛋白分别催化B95-8细胞总RNA、RT试剂盒中对照RNA进行逆转录;同时以试剂盒中的M-MLV RT为对照进行相同的逆转录,PCR后电泳比较活性.结果显示我们构建的pTWIN-p66质粒在IPTG诱导下在原核细胞中P66亚单位蛋白表达量较高,经一步纯化后蛋白凝胶扫描纯度达88%,并具有较好的逆转录活性.与M-MLV RT体外活性比较,两者活性相当.该研究为进一步开发国产HIV确证诊断试剂及抗AIDS药物的研究打下了初步基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾毅	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	104	686	13.0	23.0
2	马晶	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	7	25	2.0	5.0
3	郭秀婵	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	9	48	4.0	6.0
4	张晓光	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	12	43	2.0	6.0
5	张晓梅	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	9	112	2.0	9.0