α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达

• 作者: 左之才 廖玉辉 张乃生 欧阳红生 胡延春 邓俊良
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 农学
• 关键词: α-银环蛇毒素 基因克隆 非融合原核表达 免疫原性 生物学活性
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 463-469
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|S852
• 字数: 5507字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2006.04.016

摘要

根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段.经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析.结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%.经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性.表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28 μg/g.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓俊良	四川农业大学动物科技学院	156	749	14.0	20.0
2	胡延春	四川农业大学动物科技学院	30	140	7.0	10.0
3	左之才	四川农业大学动物科技学院	104	298	9.0	13.0
4	张乃生	吉林大学畜牧兽医学院	140	842	16.0	23.0
5	廖玉辉	四川农业大学动物科技学院	13	50	4.0	6.0
6	欧阳红生	吉林大学畜牧兽医学院	63	213	8.0	10.0