去唾液酸糖蛋白受体H1亚基的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 司进 易继林 曹利民 朱荫昌 王健 王炜煜
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 去唾液酸糖蛋白受体 原核表达 蛋白纯化 抗体
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 465-468
• 页数: 4页
• 分类号: Q513.2
• 字数: 2753字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2007.04.013

摘要

目的 在原核系统中表达并纯化去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚基,制备兔抗人ASGPR1多克隆抗体.方法 以质粒pEA1为模板,设计引物,将聚合酶链反应(PCR)扩增产物H1基因克隆到原核表达载体pET-32c中.接种含H1/pET-32c的菌株BL21单菌落至LB肉汤中,1∶100稀释转种后用1 mmol/L 终浓度的异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,用纯化的ASGPR1免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果 H1/pET-32c在原核系统中成功表达和纯化出约50.3 kD大小的融合蛋白,用纯化的H1成功制备了兔抗人H1多克隆抗体,并用6His-H1和GST-H1重组蛋白进行免疫印迹技术(Western blot)分析,证实了抗体的正确性.结论 应用多克隆抗体可以检测体内外ASGPR H1亚基基因的表达,为临床上测定血清可溶性ASGPR奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	易继林	华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科	115	637	12.0	17.0
2	王炜煜	华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科	15	65	5.0	7.0
3	王健	华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科	56	333	9.0	16.0
4	司进		12	37	4.0	5.0
5	朱荫昌		7	11	2.0	2.0
6	曹利民	华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系	10	27	3.0	4.0