Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 于力 孙敬芬 康慧媛 王全顺 王畅 窦立萍 赵瑜 达万明 靳海杰 高春记
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 kir2ds4基因 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 免疫血液学与分子血液学
• 页码范围: 663-666
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|Q782
• 字数: 3111字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2137.2008.03.043

摘要

本研究旨在构建kir2ds4基因RNAi慢病毒载体.针对已经筛选确定的kir2ds4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa Ⅰ和Xho Ⅰ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shkir2ds4慢病毒载体,应用PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定.用LV-shkir2ds4,包装系统质粒共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果表明,PCR和测序结果证实成功地构建了kir2ds4shRNA的慢病毒栽体LV-shkir2ds4.293T细胞测定病毒滴度为6×10 8TU/ml.结论:成功地构建了人kir2ds4基因RNAi慢病毒载体.