大鼠CD86基因RNAi慢病毒载体的构建与功能鉴定

• 作者: 姜睿 孙梅 张兴义 李金东 王荣有 金成彦 高南
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD86基因 RNAi 慢病毒载体 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 660-663
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3628字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.07.020

摘要

目的 构建大鼠CD86基因的RNAi慢病毒载体并在大鼠原代培养树突状细胞(DC)上鉴定其基因沉默效率.方法 将筛选获得的大鼠CD86基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA序列并退火成双链DNA,与pgC-GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.经由293T细胞包装shRNA慢病毒颗粒,随后将其感染原代培养的大鼠Dc细胞,采用real-time PCR和Western blot的方法检测靶基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率.结果 构建的慢病毒载体shRNA的PcR鉴定和测序正确,shRNA慢病毒颗粒感染大鼠DC细胞后CD86基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了90.6%;蛋白表达显著抑制.结论 成功构建了大鼠CD86基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在大鼠DC细胞上有效沉默靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙梅	吉林大学第二医院病理科	35	116	7.0	9.0
2	李金东	吉林大学第二医院胸外科	9	26	3.0	4.0
3	姜睿	吉林大学中日联谊医院骨科	14	48	3.0	6.0
4	金成彦	吉林大学第二医院胸外科	8	22	2.0	4.0
5	王荣有	吉林大学第二医院胸外科	16	46	4.0	6.0
6	张兴义	吉林大学第二医院胸外科	28	71	4.0	7.0
7	高南	吉林大学中日联谊医院胸外科	1	1	1.0	1.0