PCR方法检测河豚鱼的引物筛选及反应体系优化

• 作者: 李寿崧 林河通 江树勋 赵晨 邵碧英 闫诚 陈文炳
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 农学
• 关键词: 河豚鱼 引物筛选 PCR检测 优化
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 页码范围: 376-381
• 分类号: S917.4|Q78
• 字数: 5873字
• 语种: 中文

摘要

根据Genbank公布的河豚鱼细胞色素b基因序列,应用软件Primer Premier 5.00版设计了7对引物,经过PCR筛选,确定可以在所有8个供试河豚鱼样品中检出目的DNA片段的引物HT-1,用于建立河豚鱼的PCR检测方法.对该PCR方法中6个因素包括退火温度、Mg2+终浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTPs终浓度、引物终浓度和模板DNA用量进行优化,确定优化的PCR扩增体系:10×PCR缓冲液2μL,MgCl2终浓度1.5mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,dNTPs终浓度300μmol/L,引物终浓度0.2μmol/L,DNA模板400ng,加纯水至总体积20μL.扩增程序定为94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40个循环,72℃延伸5min.据此建立河豚鱼成分PCR检测方泫,并通过河豚鱼与非河豚鱼的PCR检测结果比较,验证了该方法的河豚鱼特异性.研究结果还表明,该方法的检出限为0.1%,含量为0.1%的河豚鱼样品PCR检出率至少在97.5%以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵碧英		66	789	16.0	24.0
2	陈文炳		56	583	13.0	20.0
3	江树勋		44	488	14.0	20.0
4	李寿崧		41	642	16.0	24.0
5	林河通	福建农林大学食品科学学院	157	2653	26.0	43.0
6	闫诚		12	38	4.0	6.0
7	赵晨		4	28	3.0	4.0