真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 何俊强 刘荭 史秀杰 岳志芹 徐彪 朱来华 梁成珠 谭乐义 赵巍 赵玉然
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 真鲷虹彩病毒 实时定量PCR 衣壳蛋白基因 SYBR Green I
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 111-116
• 分类号: S942.2
• 字数: 3945字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7075.2011.02.019

摘要

以真鲷虹彩病毒(Red-sea bream iridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Primer Express 3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR Green I实时定量PCR检测方法.将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.184 1gX+40.270,相关系数R2=0.996 9.熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃.该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应,具有特异性.利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测,其中5批鱼样品感染RSIV,并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析.