口蹄疫病毒VP2基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

• 作者: 于力 仲跻峰 何洪彬 刘国艺 刘晓 武建明 王洪梅 谢金鹿 高运东
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 VP2 转染 稳定细胞系
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 521-526
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4110字
• 语种: 中文

摘要

本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系.利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构建可表达VP2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pIRES2-EGFP-VP2重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofeetamineTM 2000将重组质粒转染293T细胞,通过Western Blot技术检测VP2蛋白的瞬时表达;然后再转染BHK-21细胞,通过G418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达EGFP的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞.再通过Western Blot技术检测其VP2的表达,最终筛选到稳定表达FMDV VP2基因的BHK-21细胞系.结果表明,VP2基因重组表达载体pIRES2-EGFP-VP2构建正确,能够在293T细胞内瞬时表达;转染BHK-21细胞,经G418筛选到表达VP2基因的BHK-21细胞克隆,经长达60 d的传代,获得了稳定表达VP2基因和EGFP的BHK-21细胞系.上述结果表明,我们建立了稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系,为进一步探讨VP2基因在FMDV诱导细胞凋亡中的作用奠定基础.