分选酶A(SrtA)的GST融合表达、纯化及活性测定

• 作者: 罗立新 邓思
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 分选酶A GST融合表达 纯化 底物 活性测定
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 121-125
• 分类号: Q78
• 字数: 4225字
• 语种: 中文

摘要

构建GST/金黄色葡萄球菌分选酶A (SrtA)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化分选酶,并利用展示在酵母表面的底物检测分选酶的活性.以pMD20-SrtA为模板,PCR扩增得到SrlA△N59基因,经BamH I和Xho I双酶切,连接到原核表达栽体pGEX-4T-1中,构建重组表达栽体pGEX-SrtA△N59,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达,GST亲和层析分离纯化得到SrtA△N59,与展示在酵母表面的底物序列QALPETGEE-linker-EGFP作用,产生游离的EGFP,通过酶标仪检测EGFP荧光强度确定分选酶的活性.结果显示,重组表达栽体pGEX-SrtA△N59经IPTG诱导,表达出相对分子质量约为42 kD的融合蛋白,SDS-PAGE分析,该融合蛋白是以可溶形式表达.分离纯化得到的分选酶与底物作用,其荧光强度由568.66±12.14增加至921.43±13.02.以上结果表明,成功构建了重组表达裁体pGEX-SrtA△N59,并在大肠杆菌中获得了可溶表达的有活性的分选酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗立新	华南理工大学生物科学与工程学院	75	847	17.0	25.0
2	邓思	华南理工大学生物科学与工程学院	2	11	2.0	2.0