基于miR30骨架的HPSE-shRNA慢病毒载体的构建及其效应研究

• 作者: 刘晓艳 张妤 方红 朱定仙
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒属 遗传载体 RNA干扰 微RNAs RNA聚合酶Ⅱ 转录启动子 葡糖醛酸糖苷酶 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 67-74
• 页数: 8页
• 分类号: Q343
• 字数: 3797字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2013.01.011

摘要

目的:模拟miR30的框架结构设计针对HPSE的shRNA,将其克隆至慢病毒载体的CMV启动子调控的表达框内,实现Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控.方法:设计3条基于miR30骨架的HPSE-shRNA,通过PCR获得目的片段,回收后与线性化LV PP-GFP载体连接产生重组慢病毒载体LV PP-GFP /miR-HPSE-shRNA,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒,感染A375细胞.以实时荧光定量PCR检测HPSE-mRNA的表达情况,以Westen blot检测HPSE蛋白的表达水平.结果:构建出以miR30为骨架的针对HPSE的慢病毒干扰载体,经阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确.实时荧光定量PCR和Westen blot结果表明,LV PP-GFP/miR-HPSE-shRNA重组病毒感染后A375细胞HPSE-mRNA和蛋白的表达明显降低.结论:本研究成功构建了以miR30为骨架的HPSE-shRNA慢病毒载体,实现了Ⅱ型启动子对RNAi的有效调控,为今后实现溶瘤病毒介导RNAi提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方红	浙江大学医学院	81	400	11.0	15.0
2	朱定仙	浙江大学医学院	5	24	4.0	4.0
3	刘晓艳	浙江大学医学院	14	72	5.0	8.0
4	张妤	浙江大学医学院	7	19	3.0	3.0