人Ism1表达载体的构建及其在293T细胞的表达

• 作者: 刘新光 孙雪荣 崔红晶 荆霞 薛传静 邓韵婷 郑慧玲
• 来源期刊: 牡丹江医学院学报
• 关键词: Ism1 表达载体 基因重组 293T细胞
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 经验交流
• 页码范围: 28-30
• 页数: 3页
• 字数: 2387字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人Ism1基因真核表达载体,并验证其在真核细胞中的表达,为相关研究奠定基础.方法:采用高保真DNA聚合酶和GC缓冲液从A549细胞扩增获取人Ism1编码序列全长,经酶切、连接、转化后,挑取阳性克隆进行菌液PCR、双酶切,及测序鉴定;用构建成功的Ism1表达载体转染293T细胞,用实时定量RT-PCR检测Ism1表达水平.结果:构建的Ism1载体经菌液PCR,双酶切鉴定后,测序结果完全正确,载体转入293T细胞后,Ism1表达量显著上升.结论:成功构建能在真核细胞中表达的人Ism1基因载体,将为相关研究提供便利.