绿豆过敏原多克隆抗体制备及间接竞争酶联免疫检测方法的建立

• 作者: 张燕 徐小婧 王宵雪 王硕 谈超 高爱华
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 绿豆过敏原 多克隆抗体 间接竞争酶联免疫检测方法
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 170-174
• 语种: 中文

摘要

目的:建立绿豆过敏原间接竞争ELISA检测方法.方法:用碱溶酸沉的方法从绿豆中提取总蛋白,考马斯亮蓝G-250法定量蛋白,SDS-PAGE分析总蛋白的分子质量.采用总蛋白免疫新西兰大耳白兔,初次免疫采用弗氏完全佐剂乳化,免疫剂量为1 mg/只；分别在初免后第14、28、32和46天加强免疫,共4次,以弗氏不完全佐剂乳化,免疫剂量为0.5 mg/只.采用Protein A-Sepharose 4B亲和层析纯化抗血清.通过优化绿豆蛋白的包被量和抗体的稀释倍数,建立间接竞争酶联免疫检测方法.结果:经SDS-PAGE分析得到主要的绿豆蛋白分子质量为50、38、34和25 ku.免疫制备的抗绿豆过敏原多克隆抗体效价达到32000.包被绿豆蛋白0.1μg/孔,抗体稀释1∶32 000,建立了间接竞争酶联免疫检测方法,灵敏度IC50=(0.72±0.035)μg/mL,检出限IC15=(0.72±0.035) μg/mL.结论:成功建立了绿豆过敏原间接竞争酶联免疫检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王硕		117	823	15.0	22.0
2	张燕	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	47	537	13.0	22.0
3	高爱华	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	2	6	1.0	2.0
4	谈超	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	3	11	2.0	3.0
5	王宵雪	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	2	16	2.0	2.0
6	徐小婧	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	3	21	3.0	3.0