基于易错PCR技术的红酵母D-氨基酸氧化酶的定向进化

• 作者: 储炬 孙晨 张嗣良 肖慈英 郭美锦
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 易错PCR 定向进化 高通量筛选 红酵母D-氨基酸氧化酶
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 52-58
• 页数: 7页
• 字数: 4750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2014.04.010

摘要

采用易错PCR技术对来源于红酵母Rhodotorula gracilis的D-氨基酸氧化酶基因(RgDAAO)进行突变,构建并优化了突变株文库;结合48深孔板的高通量筛选方法,获得突变株M3217,其Vmax相对于野生型提高了16.8％.对测序结果进行分析,发现突变酶基因序列中有5处点突变,其中3处发生了氨基酸置换,分别为:D242V/Q253R/D304V.利用Swiss-Model对突变株M3217进行三维结构模拟,结果显示所有突变位点都不在催化活性中心的附近,特别是V304的位置在连接F5和F6两个β折叠股的长loop环上.推测D304V这一突变位点很可能增强了RgDAAO二聚体形态的稳定性,或是增强了与辅酶FAD的结合能力,从而间接提高了全酶的催化活力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭美锦	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	69	606	14.0	22.0
2	张嗣良	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	238	2388	24.0	36.0
3	储炬	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	227	1871	22.0	29.0
4	肖慈英	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	6	4	2.0	2.0
5	孙晨	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	1	0	0.0	0.0