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人肝细胞核因子4α重组慢病毒载体的构建与鉴定
人肝细胞核因子4α重组慢病毒载体的构建与鉴定
作者:
伍耀豪
周嘉嘉
张杰
曾乐祥
蒋雯丽
邓小耿
邓洁敏
邱荣林
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
HNF
HNF4A
慢病毒
载体构建
摘要:
目的 构建肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4 alpha,HNF4A)的过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定,为进一步研究HNF4A的功能和作用机制奠定基础.方法 利用PCR法扩增人类基因组DNA中HNF4A的cDNA序列,并将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组PCDH-CMV-HNF4A-EF1a-GFP-puro表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒共转染到HEK-293T细胞,收集上清,将获得的病毒悬液浓缩后梯度稀释后感染HEK-293T细胞,并利用绿色荧光蛋白检测病毒滴度.将重组慢病毒感染原代培养人皮肤成纤维细胞HFFs,并利用荧光定量PCR检测HNF-4A的表达.结果 重组慢病毒表达载体PCDH-CMV-HNF4A-EF1 a-GFP-puro酶切及测序鉴定证明载体构建成功,并得到滴度为1×108 TU/mL的病毒液.病毒感染人皮肤成纤维细胞后HNF4A表达显著增强.结论 通过优化载体构建方法成功构建人HNF4A的重组慢病毒载体并可在HFFs内显著过表达HNF4A,为HNF4A的研究提供更高效稳定的基因载体.
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文献信息
篇名
人肝细胞核因子4α重组慢病毒载体的构建与鉴定
来源期刊
岭南现代临床外科
学科
医学
关键词
HNF
HNF4A
慢病毒
载体构建
年,卷(期)
2014,(5)
所属期刊栏目
论著与临床研究
研究方向
页码范围
499-504
页数
6页
分类号
R602
字数
5223字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1009-976X.2014.05.001
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
周嘉嘉
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
40
203
6.0
13.0
2
邓小耿
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
23
67
5.0
6.0
3
张杰
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
36
102
6.0
8.0
4
伍耀豪
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
13
31
4.0
5.0
5
曾乐祥
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
9
26
3.0
4.0
6
邓洁敏
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
2
1
1.0
1.0
7
邱荣林
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
7
15
3.0
3.0
8
蒋雯丽
中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科
3
8
1.0
2.0
传播情况
被引次数趋势
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引文网络
引文网络
二级参考文献
(0)
共引文献
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参考文献
(17)
节点文献
引证文献
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同被引文献
(0)
二级引证文献
(0)
1990(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
1994(1)
参考文献(1)
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1997(1)
参考文献(1)
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2001(1)
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2003(4)
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2008(1)
参考文献(1)
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2009(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
2010(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
2011(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
2014(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
2014(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
引证文献(0)
二级引证文献(0)
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节点文献
HNF
HNF4A
慢病毒
载体构建
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
岭南现代临床外科
主办单位:
广东省医学学术交流中心
出版周期:
双月刊
ISSN:
1009-976X
CN:
44-1510/R
开本:
大16开
出版地:
广州市沿江西路107号中山大学孙逸仙纪念医院
邮发代号:
创刊时间:
2001
语种:
chi
出版文献量(篇)
3834
总下载数(次)
3
总被引数(次)
9418
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