猪源多杀性巴氏杆菌脂蛋白B基因的生物信息学分析与原核表达

• 作者: 倪宏波 刘嘉静 孙建华 朱玉欣 樊宵云 蒋惠婷 高远
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 多杀性巴氏杆菌 猪 脂蛋白B 序列分析 生物信息学 同源建模 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1158-1163
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达猪源多杀性巴氏杆菌脂蛋白B(Pasteurella lipoprotein B,PlpB)基因,并进行生物信息学分析.方法 采用PCR法从猪源多杀性巴氏杆菌CVCC446株(B:2型)中扩增PlpB基因,克隆入含GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒,测序后,利用生物信息学方法对测序结果进行同源比对,分析其蛋白质的一级结构、二级结构及三级结构,并在三级结构的基础上进行同源建模.将重组表达质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,透析法纯化重组GST-PlpB蛋白,Western blot法分析其反应原性.结果 重组表达质粒经酶切鉴定证明构建正确.PlpB基因全长771 bp,编码257个氨基酸残基.生物信息学分析显示,PlpB蛋白是一个具有较高同源性的脂蛋白,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主要构件,其空间结构与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的免疫原性脂蛋白A(3K2D_A)相似性较高,以此为模板,成功构建了可靠的三维结构分子模型.表达的重组GST-PlpB蛋白相对分子质量约为56 000,主要以可溶性形式存在;纯化的重组GST-PlpB蛋白可见相对分子质量约56 000的单一条带;该蛋白具有良好的反应原性.结论 成功从猪源多杀性巴氏杆菌CVCC446株(B:2型)中扩增出PlpB基因,利用生物信息学方法,结合网络数据库,对PlpB蛋白进行了预测,构建了可靠的三维结构模型,并在大肠埃希菌中表达了重组GST-PlpB蛋白,为进一步研究HpB的功能、特征及疫苗的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪宏波	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	158	465	12.0	15.0
2	孙建华	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	15	39	5.0	5.0
3	高远	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	11	18	3.0	3.0
4	蒋惠婷	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	4	6	1.0	2.0
5	朱玉欣	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	3	6	1.0	2.0
6	刘嘉静	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	3	6	1.0	2.0
7	樊宵云	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	3	6	1.0	2.0