通过DNA改组技术定向进化赖氨酸脱羧酶基因cadA和ldc

• 作者: 张凯 汪晨 蔡恒
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: DNA改组 定向进化 赖氨酸脱羧酶 蜂房哈夫尼菌 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 20-25
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2015.05.004

摘要

利用DNA改组技术对赖氨酸脱羧酶野生型基因ldc进行随机突变，在大肠杆菌Escherichia coli JM109中构建赖氨酸脱羧酶突变体库。从E． coli JM109和蜂房哈夫尼菌Hafnia alvei AS1?1009中分别克隆出赖氨酸脱羧酶基因cadA和ldc。查询NCBI数据库得知，二者的同源性为75％。分别构建重组质粒pTrc99a cadA和pTrc99a ldc，以此2种质粒为模板，经PCR扩增，获得目的基因片段，分析目的基因片段中存在的限制性酶切位点，用多种限制性内切酶碎片化2种基因，切割成不同大小的片段。这些小片段进行不同组合，突变体经过LBXL平板初筛和高效液相色谱（ HPLC）复筛，获得1株酶活性提高的赖氨酸脱羧酶突变体，编号为 LDC216，其比酶活为4869?86 U／mg（以1 mg总蛋白计），与2种野生型赖氨酸脱羧酶基因表达的酶CadA（1652?63 U／mg）、Ldc（2365?93 U／mg）相比，在最适温度37℃、pH 6?0时，突变体的比酶活分别是上述野生型酶的2?95和2?06倍。摇瓶发酵5 h后，目标产物1，5戊二胺产量从46?9提高至63?9 g／L，提高了36％。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡恒	南京工业大学生物与制药工程学院	33	277	10.0	15.0
2	张凯	南京工业大学生物与制药工程学院	17	124	6.0	11.0
3	汪晨	南京工业大学生物与制药工程学院	6	44	4.0	6.0