猪带绦虫缺氧诱导因子-1的原核表达和真核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 侯俊玲 周玲玲 孙铭苑 张少华 才学鹏 曾巧英 梁娜 骆学农
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪带绦虫 缺氧诱导因子-1 原核表达 真核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 668-673
• 页数: 6页
• 分类号: S852.734
• 语种: 中文

摘要

为了表达猪带绦虫的缺氧诱导因子-1(HIF-1)并制备其特异性抗体,根据本课题组对猪带绦虫全基因组测序获得的HIF-1基因序列设计了1对特异性引物,以提取的猪带绦虫的总RNA为模板,通过RT-PCR获得猪带绦虫HIF-1基因.将该基因定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析.结果显示,获得了约为17.0 ku的表达产物,与目的蛋白的大小相符.原核表达的蛋白纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,ELISA和Western-blot结果表明,制备的多克隆抗体有较高的抗体效价(1∶51 200)和抗原特异性.该基因又被定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1中进行了真核表达.结果成功构建了猪带绦虫HIF-1因子的原核表达系统和真核表达系统,并制备出其多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定了基础.