pGEX－4T－2－A表达系统的构建及其融合蛋白GST－PlaA的表达优化

• 作者: 刘开放 王洲 薛正莲
• 来源期刊: 安徽工程大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 磷脂酶 A1 融合蛋白 SDS-PAGE 表达条件
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 化学与材料科学
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 2384字
• 语种: 中文

摘要

构建 pGEX－4T－2－A表达质粒来获得融合蛋白 GST－PlaA．PCR 扩增粘质沙雷氏菌 PL－06磷脂酶 A1基因PlaA,定向克隆到 pGEX－4T－2载体上．重组质粒转化至大肠杆菌JM109菌株中,进行阳性克隆的筛选并测序．将测序正确的质粒转化到表达菌株 BL21(DE3)PLysS中,经 IPTG诱导并进行 SDS－PAGE 分析,验证融合蛋白 GST－PlaA的表达,同时优化培养条件．pGEX－4T－2－A表达质粒构建成功,其融合蛋白 GST－PlaA以包涵体形式表达．在 OD值为0．8时加入终浓度为0．5 mM的 IPTG,37℃诱导8 h时,融合蛋白 GST－PlaA表达量最高．为磷脂酶 A1蛋白的纯化与功能研究奠定了基础．

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛正莲	安徽工程大学生物与化学工程学院	152	710	15.0	17.0
2	王洲	安徽工程大学生物与化学工程学院	41	98	5.0	7.0
3	刘开放	安徽工程大学生物与化学工程学院	1	0	0.0	0.0