人hnRNPA2/B1shRNA慢病毒载体的构建

• 作者: 刘瑶 方文 石祥
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒 293T细胞 载体 短发夹RNA 核内不均一核糖核蛋白基因
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 630-634
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 2621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.003

摘要

目的:构建人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体.方法:根据hnRNPA2/B1基因序列,设计4对hnRNPA2/B1 shRNA的干扰序列和1对阴性对照序列(NCShRNA);合成靶序列双链DNA,与pGMLV-SC5 RNAi慢病毒载体连接,通过测序鉴定阳性克隆;用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察转染病毒72 h后细胞中绿色荧光蛋白的表达,以验证共转染是否成功,超滤法浓缩病毒原液并测定病毒滴度.结果:经酶切和BLAST对测序结果比对,重组克隆中插入的序列与设计合成的4对shRNA及1对阴性对照oligo DNA完全一致,提示慢病毒载体构建成功;荧光显微镜下,HEK 293T细胞可见强绿色荧光蛋白表达,慢病毒载体成功共转染入HEK 293T细胞,病毒滴度为5×10uTU/L.结论:成功构建人hnRNPA2/B1基因shRNA慢病毒载体,病毒滴度达5×1011TU/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘瑶	贵州医科大学临床生化教研室	13	22	3.0	3.0
2	石祥	贵州医科大学临床生化教研室	3	5	2.0	2.0
3	方文	贵州医科大学临床生化教研室	6	20	3.0	4.0