杂合β-甘露聚糖酶AuMan5Aloop的H321对其酶学性质的影响

• 作者: 李剑芳 李雪晴 程建青 董运海 袁风娇 邬敏辰
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 工学
• 关键词: β-甘露聚糖酶 杂合酶 定点突变 突变酶 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 48-53
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.25
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170208

摘要

目的:将loop置换杂合β-甘露聚糖酶AuMan5Aloop的H321突变回野生型酶AuMan5A对应的Gly,以分析杂合酶的酶学性质与H321的相关性.方法:采用大引物PCR技术将AuMan5Aloop基因(A uman5 Aloop)编码H321的密码子CAC突变为Gly的GGT,构建突变酶基因A uman5 Aloop/H321G;借助表达质粒pPICZdA将该突变酶基因在Pichia pastoris GS115中实施表达,并分析重组表达产物AuMan5Aloop/H321G的酶学性质.结果:AuMan5AloopH321G置换前后的最适温度Topt均为75℃,高于AuMan5A的65℃;AuMan5Aloop/H321G在70℃的半衰期t1/270为300 min,介于AuMan5A (10 min)和AuMan5Aloop(480 min)之间;AuMan5Aloop/H321G比活性分别为AuMan5A和AuMan5Aloop的12.8和1.43倍;催化效率kcat/Km为后两者的14.1和1.12倍.结论:通过H321G置换及对3种酶的温度特性、比活性和催化效率的测定及比较,证实了H321对AuMan5Aloop的酶学性质有一定的影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬敏辰	江南大学无锡医学院	163	1504	22.0	29.0
2	程建青	江南大学无锡医学院	36	116	6.0	8.0
3	李剑芳	江南大学食品学院	52	513	12.0	21.0
4	董运海	江南大学食品学院	8	26	3.0	5.0
5	李雪晴	江南大学食品学院	7	5	1.0	2.0
6	袁风娇	江南大学食品学院	7	5	1.0	2.0