优化反应体系提升Phanta DNA聚合酶对非处理标本的检测性能

• 作者: 任顺利 张海如 熊晓辉 蔡甜 许文玲 郭晓博 陈振华 韩锦雄
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: PhantaDNA聚合酶 PCR 添加剂 粗品 快速检测
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 102-108
• 页数: 7页
• 分类号: Q814.9
• 字数: 4616字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2018.02.015

摘要

在食品检测、法医鉴定、分子诊断等领域经常需要对未提纯DNA的非规范处理标本进行聚合酶链式反应(PCR)扩增.然而,由于非处理标本中存在多种抑制成分,常见的DNA聚合酶并不能满足非处理标本的检测需求.本研究通过调节添加剂、Mg2+浓度以及酶量,对Phanta DNA聚合酶进行反应条件优化,提升Phanta DNA聚合酶突变体的扩增性能,并考察该聚合酶在优化条件下对血液、植物和食品等非处理标本的检测性能.结果表明:在反应缓冲溶液SF Buffer中加入质量分数5%二甲基亚砜(DMSO)和3 mmol/L Mg2+,以及50 μL反应体系中使用1 U酶时,Phanta DNA聚合酶突变体具有最强的扩增性能,可对低至0.05 ng基因组、植物叶片粗提液、高达40%全血浓度及食品粗提液进行有效检测,性能优于普通Taq DNA聚合酶及未进行反应条件优化的Phanta DNA聚合酶.本研究在食品检测、法医鉴定、分子诊断等应用中非处理标本的检测具有极大应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊晓辉	南京工业大学食品与轻工学院	142	1253	20.0	29.0
2	蔡甜		6	2	1.0	1.0
3	陈振华		8	42	3.0	6.0
4	许文玲		1	0	0.0	0.0
5	郭晓博		1	0	0.0	0.0
6	任顺利		1	0	0.0	0.0
7	韩锦雄		1	0	0.0	0.0