双芳基酮还原酶的基因挖掘及催化性质

• 作者: 倪晔 唐铭烩 许国超
• 来源期刊: 食品与生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因挖掘 双芳基酮还原酶 KpADH (R)-CPMA 性质表征
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 240-249
• 页数: 10页
• 分类号: Q554|Q781
• 字数: 8029字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2018.03.003

摘要

通过基因挖掘,获得了来源于Kluyveromyces polysporus的醇脱氢酶基因kpadh,并在Escherichia coli BL21 (DE3)中实现了可溶性表达.其编码的醇脱氢酶KpADH属于短链脱氢酶家族,可催化双芳基酮不对称还原生成手性双芳基醇,且可利用异丙醇为辅底物进行底物偶联型辅因子循环.采用Ni-NTA亲和层析柱对重组蛋白KpADH进行纯化,并研究了酶学性质.研究发现:KpADH的还原和氧化反应的最适pH分别为5.5和9.5;KpADH对1-(4'-氯苯基)-(吡啶-2'-基)-甲酮[1-(4'-chlorophenyl)(pyridin-2'-yl)methanone,CPMK]的Km和Vmax为0.500mmol/L和25.0 μmol/(min· mg),对辅底物异丙醇的Km和Vmax分别为6.36 mmol/L和21.4 μmol/(min·mg);KpADH对酮酯类底物和2,3-丁二醇有较高的催化活力.运用该重组菌对100 mmol/L的CPMK进行不对称还原,反应10h后,底物转化率大于99.8％,产物(R)-CPMA的ee值为82％,摩尔收率88.7％.本研究为利用醇脱氢酶KpADH高效合成光学纯CPMA奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪晔	江南大学生物工程学院	41	199	9.0	12.0
5	许国超	江南大学生物工程学院	14	7	1.0	1.0
9	唐铭烩	江南大学生物工程学院	1	1	1.0	1.0