猪源Viperin基因的克隆、原核表达以及抗体的制备

• 作者: 方剑玉 朱文豪 李海利 王克领 白献晓 郭小参
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪源-Viperin蛋白 原核表达 多克隆抗体 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 页码范围: 16-22
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|S828
• 字数: 5588字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.05.003

摘要

为研究猪Viperin蛋白在猪体内的抗病毒活性,用IFN-α刺激PK-15细胞24 h,收集细胞提取RNA后,采用RT-PCR方法扩增猪Viperin基因,并连接至pEASY-blunt simple平末端连接测序载体,PCR鉴定后送公司测序正确.采用DNAStar分析猪Viperin蛋白的免疫原性和疏水性,选取抗原性较好的一段基因,采用PCR扩增后,插入pET-28a+大肠杆菌表达载体,在37℃条件下用IPTG诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析证明,Viperin重组蛋白以包涵体的形式表达,包涵体蛋白经过纯化后得到目的蛋白,将纯化蛋白与弗式佐剂进行乳化后颈背部皮下注射9日龄的BALB/c小鼠,14 d后加强免疫一次,收集小鼠血清.采用Western Blot、IFA鉴定制备多克隆抗体的特异性,该多克隆抗体可以和阳性sViperin真核表达载体pCI-sVIP等表达的猪源Viperin蛋白进行特异性反应.试验成功克隆了猪Viperin基因,并制备了良好Viperin蛋白的多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王克领	河南省农业科学院畜牧兽医研究所	55	262	6.0	15.0
2	白献晓	河南省农业科学院畜牧兽医研究所	38	260	9.0	15.0
3	朱文豪	河南省农业科学院畜牧兽医研究所	44	163	8.0	11.0
4	郭小参		6	8	2.0	2.0
5	方剑玉	河南省农业科学院畜牧兽医研究所	3	5	1.0	2.0
7	李海利	河南省农业科学院畜牧兽医研究所	14	12	2.0	2.0