酿酒酵母和大肠杆菌鸟嘌呤脱氨酶基因的克隆、原核表达及活性测定

• 作者: 孙莹 张正竹 李萌萌 潘思安 邓威威
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑茶加工 咖啡碱 鸟嘌呤脱氨酶 黄嘌呤 生物合成 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（18）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 139-144
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201818022

摘要

与植物体内合成路径不同,微生物体内合成咖啡碱存在一条以黄嘌呤为底物,利用鸟嘌呤脱氨酶催化鸟嘌呤生成黄嘌呤有效合成咖啡碱的新途径.为克隆鸟嘌呤脱氨酶的基因,构建可高效合成黄嘌呤的原核表达载体并对外源蛋白活性进行检测,分别以酿酒酵母和大肠杆菌为研究材料,根据GenBank中酿酒酵母和大肠杆菌中鸟嘌呤脱氨酶基因gud1和egud序列设计引物,聚合酶链式反应特异扩增其基因片段,将目的基因连接至pMAL-c5X载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达,并用高效液相色谱法鉴定其目的蛋白的催化活性.结果表明重组载体pMAL-gud1、pMAL-egud均可用来合成黄嘌呤,且GUD1比EGUD合成黄嘌呤的效率更高.研究结果将进一步丰富黑茶加工技术理论,同时为体外构建高效咖啡碱生物工程菌提供理论支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张正竹	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	97	1388	22.0	33.0
2	邓威威	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	25	104	6.0	9.0
3	李萌萌	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	2	1	1.0	1.0
4	孙莹	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	潘思安	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	1	1	1.0	1.0