乳品中的酵母活菌数PMA-qPCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 任洪林 关玉婷 刘熙 卢士英 孙宇 孟宪梅 常江 张嵩 李岩松 李畅 李萌 柳增善 胡盼 赵柯
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 乳品 PMA qPCR 酵母活菌计数
• 年，卷（期）: 2018,（22）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 128-132
• 页数: 5页
• 分类号: TS252.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2018.22.023

摘要

本实验旨在对乳品中酵母菌活菌总数进行准确的定量检测,深入研究PMA处理乳品中酵母热损伤菌的最佳工作条件,去除热损伤死菌DNA的影响.针对从乳品中分离的三株酵母菌26S rDNA D1/D2区域序列设计引物Y3和Y4,运用实时荧定定量PCR进行序列扩增,以重组质粒pMD-18T-26S拷贝数对数与扩增循环数(Ct)值为坐标轴建立标准曲线,建立PMA-qPCR检测方法,并对实际样品中的酵母菌活菌富集后进行数量检测.PMA-qPCR法可达到国标规定的食品中酵母菌最高限量值1×102 CFU/mL的检测标准,对应Ct值为36.67±0.43,重复性良好,总耗时6～7 h,可对酵母菌数量进行准确和快速的定量分析,为乳品中腐败微生物的鉴定与监控提供有价值的借鉴.