非洲猪瘟病毒pO174L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 敬梦瑶 牛庆丽 杨吉飞 吕欣倩 樊洁 赵亚茹 杨赛霞 张忠辉 关贵全 殷宏 刘志杰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 pO174L蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 177-183
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0024

摘要

为了解析非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pO174L蛋白的功能,根据ASFV HLJ/18毒株基因序列(GenBank登录号:MK333180)设计引物,扩增O174L基因并克隆至pET-28a(+)载体中,构建原核表达载体pET-28a-O174L,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达后,通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性,用重组蛋白免疫新西兰大白兔制备家兔抗pO174L蛋白的多克隆抗体;利用间接ELISA方法测定多克隆抗体的效价,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的特异性.结果显示,用PCR扩增的O174L基因片段长564 bp,与预期相符;双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET-28a-O174L构建成功,在原核表达系统成功地表达并获得了可溶性蛋白pO174L,分子质量约为21.5 ku;用纯化的蛋白免疫动物后制备了多克隆抗体,抗体效价达到1:512 000;Western-blot和IFA结果显示制备的抗体能够特异性地识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然蛋白pO174L.本研究为深入解析pO174L蛋白的功能及其在ASFV感染和致病过程中的作用奠定了基础.