凝乳酶原(凝乳酶)二硫键Cys206-Cys210的定位突变

• 作者: 刘年娟 张国宝 张渝英 杨开宇 潘学峰 陈红杰
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 定位突变 二硫键 凝乳酶原 凝乳酶
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: Q55
• 字数: 2482字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2001.01.002

摘要

在对凝乳酶原二硫键Cys206-Cys210进行定位突变过程中发现,在相应的模板序列中有自身形成自由能为-16.1kcal/mol的茎环结构倾向,妨碍与引物结合,从而难以合成突变的DNA,采用快退火可解决此矛盾.5个突变基因均能在大肠杆菌中高效表达,除C206A外,约占细胞总蛋白的50%左右.突变体的复性结果表明,Cys206-Cys210对凝乳酶原正确折叠不是绝对必需的,但相应位置的氨基酸取代对复性效率有显著影响,在5个突变体中,C206A/C210A的复性率分别为C206S/C210S、C210A、C210S的4.5倍、20倍和30倍,而C206A完全不能复性.C206A/C210A与C206S/C210S的远紫外CD光谱与野生型基本相同,其荧光发射光谱与野生型相比最大发射峰不变,而荧光强度有显著增加.由于上述3个蛋白具有相同比活,说明突变分子能形成具有生物活性的空间构象,而只是某些色氨酸残基微环境受到微扰.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘学峰	中国科学院微生物研究所	2	12	2.0	2.0
2	杨开宇	中国科学院微生物研究所	4	20	2.0	4.0
3	张渝英	中国科学院微生物研究所	5	33	4.0	5.0
4	张国宝	中国科学院微生物研究所	2	6	2.0	2.0
5	陈红杰	中国科学院微生物研究所	1	4	1.0	1.0
6	刘年娟	中国科学院微生物研究所	1	4	1.0	1.0