幽门螺杆菌vacA-ctxB融合基因原核表达载体的构建

• 作者: 周侠 夏丽君 张任飞 李昌庆 杨致邦 陈瀑
• 来源期刊: 重庆医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 细胞空泡毒素 霍乱毒素B亚单位 载体
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 37-40
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2
• 字数: 2927字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)致细胞空泡毒素抗原(Vauolating cytotoxin antigen A,vaeA)毒性片段与霍乱毒素(Cholerae toxin,Ctx)B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,为进一步表达VCTB重组蛋白,制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础.方法:通过比较国内H.pylori代表株的vacA基因毒性亚单位,找出高度同源性片段,按基因文库中提供的vacA基因和ctxB基因序列设计引物.以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vaeA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA.以pET32(α)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因.再将纯化的ctxB基因片段插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB,构建的表达质粒pQE-vctB转化大肠杆菌Top10,培养后,提取纯化重组质粒pQE-vctB,内切酶双酶切鉴定.结果:扩增的vacA DNA片段约为723 bp,ctxB基因的DNA片段约为372bp,与预计长度相符合.构建的表达质粒pQE-vctB酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因片段相符.测序结果vctB融合基因由1092bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符.结论:含vacA和ctxB融合基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达VCTB重组蛋白奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨致邦	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	119	522	12.0	17.0
2	陈瀑	重庆医科大学附属第一医院检验科	45	242	8.0	13.0
3	张任飞	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	6	17	2.0	3.0
4	周侠	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	3	4	2.0	2.0
5	李昌庆	成都市第六人民医院检验科	8	10	2.0	2.0
6	夏丽君	成都市核工业四一六医院检验科	1	2	1.0	1.0