银杏果仁抗菌蛋白的分离纯化及其基因克隆和原核表达初步研究

• 作者: 刘曾甄 刘缙 王亚红 王强 郭蔼光
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 银杏 抗菌蛋白 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 246-253
• 分类号: S6
• 字数: 7602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.02.007

摘要

通过40%及80%(NH4)2>SO4>分级盐析,CM Sephorose F.F.离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析;从银杏(Ginkgo biloba)种仁中分离纯化到一种表观分子量约为12 KD的抗菌蛋白.经过MALDI-TOF-MSPMF鉴定表明,该蛋白与一种新型抗菌蛋白Gnk2(ginkbilobin-2)具较高匹配率(P<0.05);根据ESI-MS/MS内肽氨基酸测序结果设计简并引物,扩增该蛋白基因一段,经比对发现与Gnk2基因序列相似性也达99%.按照Gnk2基因序列设计同源引物,利用RT-PCR克隆该抗菌蛋白全长基因,提交GeneBank(Accession No.FJ865399),并以此构建原核表达载体pGEX-GK2-1转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),SDS-PAGE和Western blot分析表明,融合蛋白在大肠杆菌中能够高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭蔼光	西北农林科技大学生命学院	110	1264	19.0	27.0
2	王亚红	西北农林科技大学生命学院	22	316	6.0	17.0
3	王强	西北农林科技大学生命学院	25	190	7.0	13.0
4	刘缙	西北农林科技大学生命学院	4	41	4.0	4.0
5	刘曾甄	西北农林科技大学生命学院	1	7	1.0	1.0