甲基营养菌Methylobacterium sp.MB200中与L-丝氨酸耐受性相关基因的克隆与分析

• 作者: 周侃 唐咸来 宋修鹏 李俊芳 田丹丹 申佩弘 蒋承建
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 生物学
• 关键词: Methylobacterium sp.MB200 突变体 L-丝氨酸 耐受性 基因克隆
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 38-42
• 分类号: Q939.97
• 字数: 3108字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2011.06.008

摘要

甲基营养菌MB200,能利用非C-C键低碳化合物生长并合成L-丝氨酸,对L-丝氨酸耐受浓度低,提高其在静息细胞反应系统中对L-丝氨酸的耐受能力可更好的提高L-丝氨酸的产量.利用质粒转座子pTnMod-RKm'构建了甲基营养菌MB200的突变体库,往培养基中添加20 mg/mL L-丝氨酸对突变体库中的突变体进行平板筛选,共筛选到177株耐受L-丝氨酸的突变体,以10 mg/mL的浓度梯度复筛,发现某些突变体能最高耐受40 mg/mL L-丝氨酸.分别提取突变体总DNA,用BamHI酶随机酶切后连接到克隆载体pMD18-T上,导入到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,利用双抗性在(转座子抗性与T载体上的抗性)平板上挑取转化子,并提取质粒,酶切验证后进一步测序.共克隆到了17个基因,为提高甲基营养菌对L-丝氨酸的耐受能力提供了可研究的基因资源.