米糠脂肪氧化酶活力的快速测定及其酶学特性研究

• 作者: 徐斌 李波 董英
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 米糠 脂肪氧化酶 酶学性质 紫外分光光度法 测定
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 192-197
• 语种: 中文

摘要

紫外分光光度法是测定脂肪氧化酶活力的常用方法,但其测定准确度受到底物溶液透明度和酶液纯度的制约,尤其在反应缓冲体系的pH低于7.0的条件下,难以进行粗酶液中LOX活力的直接测定.为克服现有方法的不足,本文建立一种改良的米糠中LOX紫外光谱检测方法.首先对米糠进行脱脂处理,提高方法的检测限与精确度;采用“磷酸盐溶液-亚油酸-吐温20”体系,简单、快速地获得透明的底物溶液;在获取米糠粗酶液LOX酶学特性的基础上,通过选择合适pH的缓冲体系,确保底物溶液的相对稳定;以“磷酸盐缓冲液+底物溶液+钝化的LOX溶液”为参比,省去繁杂的酶纯化步骤.结果表明:部分脱脂对米糠中脂肪氧化酶起到激活作用,其活力最高增加了46.33％;米糠LOX最适pH 7.5,最适温度35℃;其活力测定的条件为:反应缓冲体系为2.0 mL 0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 7.5)、200 μL底物溶液,其中亚油酸和吐温-20浓度分别是2.53×10-3mol/L、1.68× 10-3 mol/L,测定温度25℃.此优化条件下,粗酶液添加量在10～40 μL范围,反应速率与酶浓度呈正比,△OD234/min=0.001V-0.0026 (R2=0.9996);米糠LOX酶促反应最大速率Vmax=0.136△A/min,米氏常量Km=11.592×10-3 mol/L.该方法能简便、快速和准确地进行米糠中LOX的活力测定以及酶钝化动力学研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董英	江苏大学食品与生物工程学院	244	2574	26.0	38.0
2	徐斌	江苏大学食品与生物工程学院	99	893	15.0	25.0
3	李波	江苏大学食品与生物工程学院	26	85	5.0	8.0