人Irisin基因的克隆、原核表达及重组蛋白的纯化

• 作者: 何赛 李洁 郁建锋 顾志良
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸢尾素(Irisin) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1522-1528
• 分类号: Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.10.008

摘要

鸢尾素(Irisin)是新发现的一种肌肉因子,其前体是Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDCS).为实现人(Homo sapiens) Irisin的原核表达,通过反转录PCR得到人肌肉组织总RNA的cDNA,并以特异性引物扩增得到人FNDC5基因的cDNA序列.以特异性引物扩增将人Irisin基因序列引入NdeⅠ和Xho Ⅰ酶切位点,经双酶切后插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒并转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3) pLysS.通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)检测,用镍柱纯化目的蛋白,并用Western blot方法鉴定.DNA序列分析结果显示,克隆的人Irisin基因序列和NCBI公布的序列一致,并成功构建了pET-30a-Irisin重组表达载体;SDS-PAGE电泳检测和Western blot结果表明,表达蛋白分子量约为14kD,与预期大小一致;实现了人Irisin的可溶性表达,得到了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究人Irisin蛋白的结构、功能及应用提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾志良	常熟理工学院生物与食品工程学院	65	234	8.0	12.0
2	郁建锋	常熟理工学院生物与食品工程学院	53	317	10.0	15.0
3	何赛	常熟理工学院生物与食品工程学院	3	3	1.0	1.0
5	李洁	常熟理工学院生物与食品工程学院	5	8	2.0	2.0