组蛋白赖氨酸转移酶KAT6 B基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘兆良 安静 宋爱利 曹涤非 赵丽丽 靳俊杰
• 来源期刊: 实用肿瘤学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 载体构建 基因沉默 RNA干扰 KAT6B 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11904/j.issn.1002-3070.2018.01.001

摘要

目的 在乳腺癌细胞T47D中利用构建的短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体对赖氨酸乙酰转移酶6B(KAT6B/MORF)基因进行RNA干扰,通过下调该基因的表达来研究其对乳腺癌细胞的抑制功能.方法 针对KAT6B基因的CDS区合成2对单链的短发卡RNA(shRNA5、shRNA8)及相应的对照组序列(Scramble5、Scramble8),通过聚合酶链式反应(PCR)扩增后,与双酶切(EcoRl、Xhol)线性化处理的入门载体(pENTR/pSM2(CMV)GFP)同源重组,获得含有目的片段的入门克隆.再通过Gateway系统的LR克隆反应,将目的片段重组到目的载体(pLenti x1 puro DEST)上.利用慢病毒包装系统,将慢病毒包装质粒分别与构建好的两对目的质粒共转染到HEK-293T细胞中,收集病毒上清,转导乳腺癌细胞T47D.最后,通过免疫印迹法(Western blot)检测KAT6B的表达.结果 对转化获得的单菌落进行测序鉴定,与目标序列完全一致,表明已经成功构建慢病毒载体.Western blot结果显示KAT6B基因的蛋白表达量在每组shRNA中都比相应的对照组显著降低,表明构建的基因沉默载体在乳腺癌细胞T47D中对KAT6B基因具有基因沉默作用.结论 本研究通过构建KAT6B基因的shR-NA慢病毒基因沉默载体,在乳腺癌细胞T47D中对KAT6B基因进行RNA干扰的研究,为进一步研究KAT6B基因在乳腺癌中发挥肿瘤抑制作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安静	哈尔滨医科大学附属肿瘤医院肿瘤防治研究所	17	18	2.0	3.0
3	赵丽丽	哈尔滨工业大学化工与化学学院	9	271	5.0	9.0
4	曹涤非	哈尔滨医科大学附属肿瘤医院肿瘤防治研究所	15	26	3.0	4.0
10	靳俊杰	哈尔滨医科大学附属肿瘤医院肿瘤防治研究所	1	2	1.0	1.0
19	宋爱利	哈尔滨工业大学化工与化学学院	1	2	1.0	1.0
20	刘兆良	哈尔滨医科大学附属肿瘤医院肿瘤防治研究所	1	2	1.0	1.0